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Multiplex-PCR-Kurs
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188.10 Euro
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Produktbeschreibung
Wann und Wo?
Datum: Bitte erfragen Sie einen Termin für 2024
Dauer: 3 Tage - Dienstag bis Donnerstag
Zeit: 9:00 Uhr bis 16:30 Uhr
Ort: Bremen (2024)
Einführung
Multiplex
en bedeutet, Sie kombinieren in einem Ansatz mehrere verschiedene PCRs, zum Beispiel eines zur Detektion von Legionellen, das zweite gegen Legionella pneumophilia und dann noch eine Inhibitor-Kontrolle. Jetzt könnte man meinen, wenn die Assays einzeln optimal laufen, etabliert sind und seit langem in Ihrem Labor zuverlässig laufen, dann werden sie das auch in der Kombination tun. Aber weit gefehlt, bis hin zu "es geht gar nichts mehr" ist alles möglich.
Genau mit dieser Fragestellung beschäftigen wir uns in dem Workshop.
Der Kurs berücksichtigt sowohl diejenigen die klassisches PCR machen mit dem Nachweis mittels Gelelektrophorese, aber auch real-time PCR mit dem Nachweis als Sonden-Multiplexe.
Lernziele
Am Ende des Kurse haben Sie einen Überblick über die verschiedenen Multiplex-Ansätze: DNA-Fingerprints
, MLPA
(Amplifikation von bis zu 40 Primer-Pärchen), aber auch nested-PCRs
. Aus dem Bereich der real-time PCR: Multiplexen mit Sonden und mit SYBR-Green
, ja das geht auch.
Wir zeigen Ihnen die Etablierung von der Analyse der Primer bis zu kombinatorischen Ansätzen wie Taguchi
und besprechen mögliche Probleme (Troubleshooting).
Zielgruppe
Technische oder wissenschaftliche MitarbeiterInnen. Sie haben molekularbiologische und/oder PCR- und qPCR-Erfahrung und wollen oder arbeiten bereits an einem Multiplex-PCR.
Gut zu wissen:
- Wenn Sie geringe PCR oder real-time PCR Erfahrung haben, können Sie einen kurzen Vorkurs auf unserer Lernplattform besuchen.
"Die Theorie träumt, die Praxis belehrt." ( Karl von Holtei )
Theorieteil
- Einführung in die PCR sowie Real Time PCR ( RT-PCR , qPCR ) Wiederholung und als Vorkurs verfügbar
- Primer-Analyse und Design für ein Multiplex-PCR. Auf was muss man achten? Gibt es besondere Regeln für ein Multiplex
- Polymerasen, Puffer und Additive : Was ist am besten geeignet für ein Multiplex
- Welches Temperatur-Zeit-Profil ist nötig? Hotstart -PCR und Touchdown
- Die spezielle Rolle des Magnesiums: Optimierung von Magnesium/Primer/Sonden-Konzentrationen
- Das Problem mit der Inhibitor-Kontrolle , welche soll man nehmen?
- Überblick zu Multiplex-Methoden: nested Multiplex, STR-Multiplex, MLPA u.a.m
Praxisbeispiele
- Ich habe Ihnen zwei Beispiele herausgesucht: einmal ein Multiplex-PCR (7Plex). Wir designen die Primer und versuchen es im Labor zu etablieren (Reagenzien schicke ich Ihnen zu).
- Und das zweite Experiment wird ein Multiplex-Sonden-PCR sein, Nachweis von Lactose-Intoleranz , Fruktose-Intoleranz und Gluten-Unverträglichkeit .
Nachbesprechung
Zusätzlich biete ich eine gemeinsame Online-Fragestunde für Trouble-Shooting oder weitergehende Fragen an. Die Fragestunde wird mit GoTo-Meeting
durchgeführt.
Lernplattform
Eine Lernplattform (Moodle, e-learning4science.com ) hält für Sie das Script als PDF, Versuchsbeschreibungen und Literatur-Links-Downloads bereit.
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