Lernziele

Zielgruppe

Gut zu wissen:

Wenn Sie wenig PCR oder real-time PCR Erfahrung haben, können Sie einen kurzen Vorkurs auf unserer Lernplattform besuchen.

• Wenn Sie Ihre Kamera nicht einschalten möchten, ist das kein Problem: Zur Begrüßung und zum Abschied wäre es nett zu sehen wer da ist.
• Wenn Sie nicht persönlich angesprochen werden möchten bei Fragen zum Beispiel, ist das auch kein Problem.
• Wenn Sie lieber Fragen per Chat stellen wollen, können sie das gerne machen, ich versuche die Fragen zu passenden Zeiten zu beantworten.
• Wenn Sie kurzfristig weg müssen, sagen sie bitte per Chat kurz Bescheid.

"Auch eine schwere Tür hat nur einen kleinen Schlüssel nötig.“ – (Charles Dickens)

Theorieteil

Die einzelnen Unterthemen bearbeiten wir immer nach dem gleichen Dreiklang wir schauen was gibt es Neues, welche Schwierigkeiten gibt es und wie können wir optimieren.

Unterthemen

• Template-Präparation DNA/RNA/cDNA:
  Stichworte sind: Direct PCR DNA und RNA ohne Isolation und Reinigung welche Methoden, neue Extraktoren gibt es Vor- und Nachteile, wann kann man welche Methode anwenden? cfDNA sehr kleine DNA Fragmente (<160 bp) Isolation und Nachweis, PCR- und Primer-Design für kleinste Fragmente, Beispiel Ins/Dels zu klein für Sonden?
  Micro-RNA: Isolation und cDNA Synthese wie geht das?
• Inhibitoren: Überblick über Inhibitionskontrollen und eigene Arbeiten
• Genotypisieren mit HRM, SYBR-Green Schmelzkurve im Multiplex und Sonden
  Stichworte sind: HRM und Multiplexen, Verschieben des Schmelzpunkte durch Primer-Modifikation, Sonden versus LUX-Primer, Sonden-Schmelzkurve, Protokoll für Taqman Melt.
• Neues zu Primer und Sonden: 5'-Flap-Primer, extrem lange Primer, Mediator-Sonden, ds-Sonden
• Standard-Additionsverfahren zur genauen Quantifizierung
• Lebend-Tot-Nachweis: Problematik, Eigene "Beta-Tests"
• Update MIQE-Richtlinien
• Eigene Marktübersichten: Cycler, Polymerasen, cDNA-Synthese-Kits

Praxisbeispiele

• cfDNA, Erhöhung der Nachweisgrenze durch Multikopie Targets
• Methylierungsspezifisches PCR

Nachbesprechung

• Zusätzlich biete ich eine gemeinsame Online-Fragestunde für Trouble-Shooting oder weitergehende Fragen an. Die Fragestunde wird mit GoTo-Meeting durchgeführt.

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